hCov-NL63-N Pseudovirus Standard Reference
CBV30018
| I. 背景 | |
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hCov-NL63最早是在2004年初在荷蘭從一個7個月大的嬰兒中從吸出物中分離出來的。此后，HCoV-NL63的感染已被證明是世界范圍內(nèi)普遍存在的疾病，并與許多臨床癥狀有關(guān)。診斷包括嚴(yán)重的下呼吸道感染，臀部炎和細(xì)支氣管炎。HCoV-NL63引起兒童疾病，老年人和免疫功能低下的兒童，在兒童呼吸道感染中占1.0-9.3％。  根據(jù)CDC和WHO的介紹，針對HCoV-NL63的核酸診斷一般是針對RdRP (RNA-dependent RNA polymerase)、Gene N和Gene E， Gene S更多用于對應(yīng)藥物和疫苗的開發(fā)。NCBI收錄序列為JX504050.1，全長27553bp，基因編碼4個結(jié)構(gòu)蛋白：S，M，N和E。 以往針對試劑盒檢測限的性能評價，一般是選擇體外轉(zhuǎn)錄的RNA、或者臨床陽性病毒來作為標(biāo)準(zhǔn)品，用于性能評價。但是兩者都具有很明顯的確定，首先體外轉(zhuǎn)錄的RNA，一般是很純，單一，不涉及提取，不符合臨床病毒的微環(huán)境，因此必然造成檢測靈敏度被高估，這也是存在高概率假陰性的主要原因；再次臨床陽性病毒，即使是滅活的病毒，也是存在很大的生物安全隱患，因此要求實驗室級別為P3-P4，大部分開發(fā)診斷試劑盒單位都不滿足改要求，另外臨床陽性病毒也是來源很有限，不能被穩(wěn)定供應(yīng)，反復(fù)用于試劑盒的性能評價。 |
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| II.產(chǎn)品描述 | |
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有病毒的完整包膜結(jié)構(gòu)，有HCoV-NL63對應(yīng)的核酸序列，但是生物安全風(fēng)險較低的假病毒標(biāo)準(zhǔn)品，完美的克服了選擇體外轉(zhuǎn)錄的RNA、或者臨床陽性病毒來作為標(biāo)準(zhǔn)品的缺點，非常適合用于核酸診斷性能評價的標(biāo)準(zhǔn)品。 構(gòu)建過程：HCoV-NL63基因合成→假病毒包裝→純化→QC檢測（ddPCR） |
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| III. 產(chǎn)品介紹 | |
| 產(chǎn)品名稱: | hCov-NL63-N Pseudovirus Standard Reference |
| 對應(yīng)序列（詳情見附錄）: |
Gene N（1134bp） |
| 產(chǎn)品規(guī)格: | 1ml |
| 拷貝數(shù): | >1x10e7copies/ml |
| 生物安全級別: | P2 |
| 運輸與保存方式: | 干冰運輸，-90 ~ -70°C保存 |
| 有效期: | |
| IV. 產(chǎn)品用途與優(yōu)勢 | |
| 產(chǎn)品用途: | HCoV-NL63診斷試劑盒性能評價 |
| 產(chǎn)品優(yōu)勢: | •HCoV-NL63的假病毒標(biāo)準(zhǔn)品，區(qū)別于以往體外合成的RNA、臨床陽性活病毒，完美克服兩者的缺點，真正適合用于試劑盒的性能評價，包含檢測限、特異性，重復(fù)性等；
• 根據(jù)HCoV-NL63冠狀病毒的特點，選取了ORF1ab/RdRP（RNA-dependent RNA polymerase）、Gene E(envelope protein)、Gene N(nucleocapsid phosphoprotein)合計3個區(qū)段的序列，用于假病毒的包裝，3個區(qū)段很好的表征了HCoV-NL63的特征序列； • 科佰生物設(shè)計了ddPCR體系的引物、探針序列，可不需要構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提下完成對假病毒的QC拷貝數(shù)檢測，非常準(zhǔn)確表征標(biāo)準(zhǔn)品的拷貝數(shù)，而且克服了Q-PCR分析CT值的相對判斷標(biāo)準(zhǔn)的不準(zhǔn)確性； • 假病毒標(biāo)準(zhǔn)品，無致病性，可再生，質(zhì)控方法可靠，批次間穩(wěn)定，可以長期穩(wěn)定制備和供應(yīng)，而且要求實驗室生物安全級別為P2，滿足很多單位的安全需求。 |
| Ⅴ. 附錄 | |
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Gene N: ATGGCTAGTGTAAATTGGGCCGATGACAGAGCTGCTAGGAAGAAATTTCCTCCTCCTTCATTTTACATGCCTCTTTTGGTTAGTTCTGATAAGGCACCATATAGGGTCATTCCCAGGAATCTT GTCCCTATTGGTAAGGGTAATAAAGATGAGCAGATTGGTTATTGGAATGTTCAAGAGCGTTGGCGTATGCGCAGGGGGCAACGTGTTGATTTGCCTCCTAAAGTTCATTTTTATTACCTAGGT ACTGGACCTCATAAGGACCTTAAATTCAGACAACGTTCTGATGGTGTTGTTTGGGTTGCTAAGGAAGGTGCTAAAACTGTTAATACCAGTCTTGGTAATCGCAAACGTAATCAGAAACCTTTG GAACCAAAGTTCTCTATTGCTTTGCCTCCAGAGCTCTCTGTTGTTGAGTTTGAGGATCGCTCTAATAACTCATCTCGTGCTAGCAGTCGTTCTTCAACTCGTAACAACTCACGAGACTCTTCT CGTAGCACTTCAAGACAACAGTCTCGCACTCGTTCTGATTCTAACCAGTCTTCTTCAGATCTTGTTGCTGCTGTTACTTTGGCTTTAAAGAACTTAGGTTTTGATAACCAGTCGAAGTCACCT AGTTCTTCTGGTACTTCCACTCCTAAGAAACCTAATAAGCCTCTTTCTCAACCCAGGGCTGATAAGCCTTCTCAGTTGAAGAAACCTCGTTGGAAGCGTGTTCCTACCAGAGAGGAAAATGTT ATTCAGTGCTTTGGTCCTCGTGATTTTAATCACAATATGGGGGATTCAGATCTTGTTCAGAATGGTGTTGATGCCAAAGGTTTTCCACAGCTTGCTGAATTGATTCCTAATCAGGCTGCGTTA TTCTTTGATAGTGAGGTTAGCACTGATGAAGTGGGTGATAATGTTCAGATTACCTACACCTACAAAATGCTTGTAGCTAAGGATAATAAGAACCTTCCTAAGTTCATTGAGCAGATTAGTGCT TTTACTAAACCCAGTTCTATCAAAGAAATGCAGTCACAATCATCTCATGTTGCTCAGAACACAGTACTTAATGCTTCTATTCCAGAATCTAAACCATTGGCTGATGATGATTCAGCCATTATA GAAATTGTCAACGAGGTTTTGCATTAA |
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